RESUMEN
INTRODUCTION: Healthcare associated infections due to carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae (CRKP) are a major concern in Portuguese hospitals. Whole genome sequencing (WGS) can improve infection control, but this practice is not routinely used by hospital clinical laboratories in Portugal. We simulated the investigation of a CRKP outbreak based on WGS, with the aim of determining, in the minimum possible time, genetic relatedness between CRKP clinical and environmental isolates. MATERIAL AND METHODS: Ten CRKP clinical isolates routinely obtained in the hospital laboratory were used. Forty environmental samples - from sinks and sink drains of ward rooms - were collected. Environmental samples were plated on selective media and presumptive CRKP colonies were isolated. Total DNA was extracted from all putative CRKP isolates and sequenced. Clonal relatedness was determined by multi-locus sequence typing and core genome single nucleotide polymorphism analysis; the presence of carbapenemase genes was evaluated. RESULTS: Clinical isolates were characterized in 48 hours: eight strains were confirmed as CRKP, of which six were of ST13 and carried blaKPC-3. Environmental samples results were obtained in six days: eight CRKP were isolated from which five were of ST13 and carried blaKPC-3. Clinical and environmental ST13 isolates were highly related: ten (of 11) isolates differed from each other in < 0.001% of 2 172 367 core nucleotides. DISCUSSION: WGS can be used as a high-resolution effective tool to investigate healthcare associated infections and track routes of dissemination in real-time. CONCLUSION: In Portugal, routine use of WGS to improve infection control could thrive through collaborative initiatives between hospitals and research institutes.
Introdução: As infeções associadas aos cuidados de saúde por Klebsiella pneumoniae resistente aos carbapenemos (CRKP) são uma preocupação nos hospitais portugueses. A sequenciação total do genoma [whole genome sequencing (WGS)] pode ajudar no controlo de infecção, mas esta prática não é comummente utilizada nos laboratórios clínicos hospitalares em Portugal. O objetivo deste estudo foi simular a investigação de um surto causado por CRKP, utilizando WGS. Pretendia-se testar a utilização desta técnica e determinar, no menor tempo possível, relações genéticas entre estirpes. Material e Métodos: Foram analisados dez isolados clínicos de CRKP. Foram obtidas quarenta amostras ambientais que foram inoculadas em meio seletivo para isolamento de colónias sugestivas de CRKP e depois sequenciado o DNA total dos isolados presumptivamente identificados como CRKP A relação clonal entre as estirpes foi determinada por multi-locus sequence typing e análise de single nucleotide polymorphisms no genoma core. Foi determinada a presença de genes de carbapenemases. Resultados: Os isolados clínicos foram caraterizados em 48 horas: oito isolados foram confirmados como CRKP. A maioria pertencia ao ST13 (n = 6) e possuía o gene blaKPC-3. As amostras ambientais foram caraterizadas em seis dias: foram isoladas oito CRKP, das quais cinco eram ST13 e continham o gene blaKPC-3. Os isolados ST13 clínicos e ambientais eram muito semelhantes entre si: dez dos 11 isolados diferiam entre si em menos de 0,001% dos 2 172 367 nucleótidos core analisados. Discussão: A sequenciação total do genoma pode ser usada como uma ferramenta útil para investigar infecções nosocomiais e rastrear cadeias de disseminação em tempo real. Conclusão: Em Portugal, o uso desta técnica em controlo de infecção pode ser implementado através de colaborações entre hospitais e institutos de investigação.
